在漫威电影宇宙中，神盾局特工中出现过以下超级英雄：

尼克·弗瑞：

神盾局局长，虽然他不是超级英雄，但他在漫威电影宇宙中扮演了重要角色。

菲尔·科尔森：

神盾局特工，由克拉克·格雷格饰演，是《神盾局特工》的主角。

沃德探员：

由布雷特·道顿饰演，是科尔森的搭档之一。

梅探员：

由温明娜饰演，是科尔森的搭档之一。

菲兹探员：

由伊恩·德·卡斯泰克饰演，是科尔森的搭档之一。

西蒙斯探员：

由伊丽莎白·亨斯屈奇饰演，是科尔森的搭档之一。

斯凯：

由汪可盈饰演，是一名平民骇客，后成为神盾局特工。

此外，虽然《神盾局特工》主要围绕神盾局的特工展开，但剧中也提到了其他漫威英雄，例如：

钢铁侠：

托尼·斯塔克，在多部漫威电影中出现，并在《复仇者联盟》中由尼克·弗瑞派遣到神盾局。

美国队长：

史蒂夫·罗杰斯，在《复仇者联盟》中由尼克·弗瑞集结到神盾局。

雷神：

索尔·奥丁森，在《复仇者联盟》中由尼克·弗瑞集结到神盾局。

黑寡妇：

娜塔莎·罗曼诺夫，在《复仇者联盟》中由尼克·弗瑞集结到神盾局。

鹰眼：

克林特·巴顿，在《复仇者联盟》中由尼克·弗瑞集结到神盾局。

这些英雄在《神盾局特工》中都有不同程度的参与和互动。